荚膜唾液酸对猪链球菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路影响的研究

[目的]探索猪链球菌2型感染后单核/巨噬细胞启动信号转导通路机制,探讨荚膜唾液酸对细菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的影响.[方法]以小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,采用RT-PCR、Western blotting、免疫荧光和ELISA法分别检测猪链球菌2型野毒株、唾液酸缺失突变株、唾液酸回复突变株感染后不同时间点巨噬细胞TLR2 mRNA转录水平、AKT磷酸化水平、NF-κB激活程度以及前炎症因子TNF-α分泌水平;再分别用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂预处理巨噬细胞,检测上述分子的表达水平.[结果]唾液酸缺失株可选择性的活化信号转导通路途径.RT-PCR结果表明,缺失株TLR2 mRNA表达水平自1h开始升高,1.5 h达高峰后有所下降;Westernblotting显示,缺失株TLR2蛋白表达水平7h达高峰,9h下降;p-AKT水平1.5-5 h持续稳定在高峰水平,7h后开始下降;免疫荧光可见15 min NF-κB激活-核转运程度较高;ELISA结果显示,10h之后TNF-α的水平显著高于野生株和回复株.使用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂,三菌株通路活化程度均明显受抑制.[结论]荚膜唾液酸可抑制宿主免疫细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的激活,藉此参与细菌逃避宿主的免疫防御作用.     

异叶三宝木叶的化学成分研究(英文)

从异叶三宝木(Trigonostemon flavidus)叶中分离得到9个化合物,经波谱数据分析鉴定为robustic acid(1),1-[6-hydroxy-2-methoxy-2″,2″-dimethylpyrano-(5″,6″:3,4)]-2-(4’-methoxyphenyl)-1,2-ethanedione(2),3β-ursolic acid(3),(6S,7E)-6-hydroxy-4,7-megastigmadien-3,9-dione(4),3(-hydroxy-5,6-epoxy-7-megastigmen-9-one(5),(3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one(6),loliolide(7),methyl P-coumarate(8),和methyl si-napate(9)。化合物1～7和9为首次从三宝木属(Trigonostemon)植物中分离得到。     

干旱条件下AM真菌对植物生长和土壤水稳定性团聚体的影响

采用分室培养系统,模拟正常水分和干旱胁迫两种环境条件,探讨不同丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi,AMF)对紫花苜蓿(Medicago sativa L.)生长和土壤水稳性团聚体的影响.试验条件下,Glomus intraradices对苜蓿根系的侵染率均显著高于Acaulospora scrobiculata和Diversispora spurcum接种处理.正常水分条件下,供试AM真菌均能显著提高植株生物量及磷浓度.干旱胁迫显著抑制了植株生长和菌根共生体发育,总体上菌根共生体对植株生长没有明显影响,接种D.spurcum甚至趋于降低植株生物量;同时,仅有G.intraradices显著提高了植株磷浓度.AM真菌主要影响到＞2mm的水稳性团聚体数量,以G.intraradices作用效果最为显著.在菌丝室中,G.intraradices显著提高了总球囊霉素含量.研究表明AM真菌对土壤大团聚体形成具有积极作用,而菌根效应因土壤水分条件和不同菌种而异,干旱胁迫下仅有G.intraradices对土壤结构和植物生长表现出显著积极作用.在应用菌根技术治理退化土壤时,需要选用抗逆性强共生效率高的菌株,对于不同AM真菌抗逆性差异的生物学与遗传学基础尚需进一步研究.     

土著菌根真菌和混生植物对羊草生长和磷营养的影响

植物种间相互作用直接影响植物生长、根系可塑性及养分吸收,而与植物共生的丛枝菌根真菌可以改变植物个体和种间养分资源的分配,具有协调种间竞争的潜力.以我国北方草甸草原建群种羊草(Leymus chinensis)和混生植物紫花苜蓿(Medicago sativa)及独行菜(Lepidium spetalum)为供试植物,通过模拟盆栽试验,研究了土著菌根真菌和混生植物对羊草生长、根系形态及磷营养的影响.试验结果表明,土著菌根真菌能够与羊草及紫花苜蓿形成良好共生,而独行菜根内基本未形成菌根共生结构.土著菌根真菌显著降低了羊草及独行菜的生物量,但促进了紫花苜蓿的生长;混种紫花苜蓿显著促进了羊草的生长,而混种独行菜则显著抑制了羊草的生长.土著菌根真菌对羊草根系形态的影响表现出与植株生物量类似的趋势,但不同混生植物对羊草根系生长均无显著影响.土著菌根真菌和混生植物对羊草植株磷含量均无显著影响.与混生植物相比,羊草具有较高的比根长和磷吸收能力,这也解释了其负向菌根依赖性.研究证实了菌根真菌和植物种间相互作用均是影响草原优势植物生长和根系发育的重要因素,深入研究其交互作用对于科学管理草地生态系统,维持植物群落的稳定性和生态系统生产力具有重要意义.     

鹰嘴豆种子发芽和成熟过程中α-淀粉酶抑制剂的活性研究

以5种不同来源的α-淀粉酶为检测试剂,对鹰嘴豆种胚芽和子叶α-淀粉酶抑制剂在发芽和成熟过程中的抑制活性进行测定。结果表明:α-淀粉酶抑制剂主要存在于胚芽中; 发芽过程中,发芽1 d后,胚芽提取液对AOA的抑制活性降为9.9%,而对HSA、PPA和PA的抑制活性都检测不到。子叶提取液对AOA和HSA的抑制活性分别降为21.5%和28.3%,而对BSA和PPA则检测不到活性。发芽4 d后,无论是子叶还是胚芽提取液对5种来源的α-淀粉酶都检测不到抑制活性; 种子成熟过程中,子叶和胚芽提取液对α-淀粉酶的抑制活性均随种子成熟度的提高而提高,30 d时达到最大,且胚芽提取液对HSA、PA的抑制活性较高,分别为48.9%和47.5%。     

蚓果芥乙烯受体基因的克隆与进化分析

采用已报道的十字花科植物乙烯受体基因(Ethylene Receptor 1,ETR1)通用引物,以蚓果芥基因组DNA为模板,经PCR分析BhETR1的多态性,进而从分子水平上阐明蚓果芥的进化特征.结果表明:(1)已克隆得到的14条ETR1基因序列,长度为1 644～1 661 bp;经Bioedit软件比对,14条核苷酸序列之间相似性为93％～98％,蛋白氨基酸序列相似度为78％;采用DnaSP v5程序分别统计BhETR1序列多态性,发现14条BhETR1序列形成了14种单倍型.(2)从GenBank数据库下载蚓果芥近缘物种ETR1序列进行进化分析,系统发育分析表明蚓果芥14条ETR1序列形成3大分支;根据分支进化关系,每支中分别选取克隆2(c2)、克隆29(c29)、克隆35(c35)与拟南芥ETR1(AtETR1)和琴叶鼠耳芥ETR1(AlETR1)的序列进行比对,其一致性均为78％,说明BhETR1是一个乙烯受体类似(ETR1-like)基因,而蚓果芥自身14条序列的高度异质性表明蚓果芥的遗传背景相对复杂.     

大黄酸氨基酸衍生物合成及放射增敏作用的初步研究

本文以大黄酸为先导化合物,将其3位羧基分别与亮氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、色氨酸、蛋氨酸、脯氨酸和2-氨基丁酸的氨基形成酰胺键,合成8个衍生物,再碱化得钠盐。采用MTT法测定这些化合物对H460肺癌细胞的体外生长抑制活性。选取活性较好的化合物,在相应的IC15和IC20浓度下,初步测定放射增敏活性。结果显示除大黄酰色氨酸钠在24 h和48 h和大黄酰脯氨酸钠在48 h有促进增殖作用,其余大黄酸氨基酸钠盐衍生物对肺癌H460细胞具有显著的浓度和时间依赖型生长抑制活性。其中大黄酰亮氨酸钠作用24、48、72 h的IC50值分别为279.863、92.735、65.567μM,大黄酰异亮氨酸钠作用24、48、72 h的IC50值分别为205.251、164.222、77.442μM,抑制作用较大黄酸钠有明显提高(P<0.05)。初步放射增敏活性测定表明,大黄酰异亮氨酸钠在相应的IC15和IC20浓度下与照射联用,测得的OD值均小于单纯照射组,说明它有放射增敏作用。此结果可为后续寻找高效低毒的肿瘤放射治疗增敏药物提供研究基础。     

鹦哥岭山地雨林不同海拔区森林群落的生物量研究

为了解海南岛不同海拔热带山地雨林生态系统的生物量现状,在鹦哥岭山地雨林的择伐林中按高、中、低3个海拔区分别设立50个10m×10m的固定样方,并对植被、土壤、凋落物等进行了系统调查。结果表明：鹦哥岭山地雨林的生物量较低,地上生物量仅为152.6 t hm-2,乔木层生物量为142.6 t hm-2;乔木层的生物量,高海拔区明显高于中、低海拔区,分别为197.6 t hm-2,112.2 t hm-2和117.8 t hm-2;生物量的分配规律是乔木层>枯倒木>凋落物,分配比例为94.22%：2.90%：2.88%,树干>树枝>树皮>树叶,分配比例为72.63%：15.35%：9.23%：2.79%;因择伐林的原因,大径级和特大径级木的比例偏低,小（5cm~19.9cm）、中（20cm~35.9cm）、大（36cm~47.9cm）、特大径木（≥48cm）生物量分配比例为35.89%：26.24%：16.01%：21.86%;鹦哥岭山地雨林经过30多年的恢复,仍然处于演替的中期阶段,因此固碳潜力巨大。     

结缔组织生长因子基因RNA干扰复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定

目的：构建能介导结缔组织生长因子（CTGF）基因RNA干扰的复制缺陷型腺病毒表达载体。方法：以大鼠CTGF基因为靶序列,设计并合成含编码短发夹RNA序列的寡核苷酸,构建腺病毒穿梭质粒P-shuttle-CTGF,酶切及测序分析正确后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染AD-293细胞,进行病毒包装,得到腺病毒载体Ad．H1-CTGF,用该载体感染HSC-T6细胞,观察其对CTGF基因表达抑制的效果。结果：构建的腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF经酶切、测序分析证实正确;包装的病毒载体滴度为4×1010PFU／mL,感染HSC-T6细胞后,Western印迹证实CTGF表达显著减少。结论：构建的腺病毒载体Ad．H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达,为抗纤维化研究提供了有力的工具。     

Effects of inflammatory factors on mesenchymal stem cells and their role in the promotion of tumor angiogenesis in colon cancer

Mesenchymal stem cells (MSCs), which are modulated by cytokines present in the tumor microenvironment, play an important role in tumor progression. It is well documented that inflammation is an important part of the tumor microenvironment, so we investigated whether stimulation of MSCs by inflammatory cytokines would contribute to their ability to promote tumor growth. We first showed that MSCs could increase C26 colon cancer growth in mice. This growth-promoting effect was further accelerated when the MSCs were pre-stimulated by inflammatory factors IFN-γ and TNF-α. At the same time, we demonstrated that MSCs pre-stimulated by both inflammatory factors could promote tumor angiogenesis in vivo to a greater degree than untreated MSCs or MSCs pre-stimulated by either IFN-γ or TNF-α alone. A hen egg test-chorioallantoic membrane (HET-CAM) assay showed that treatment of MSC-conditioned medium can promote chorioallantoic membrane angiogenesis in vitro, especially treatment with conditioned medium of MSCs pretreated with IFN-γ and TNF-α together. This mechanism of promoting angiogenesis appears to take place via an increase in the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), which itself takes place through an increase in signaling in the hypoxia-inducible factor 1α (HIF-1α)-dependent pathway. Inhibition of HIF-1α in MSCs by siRNA was found to effectively reduce the ability of MSC to affect the growth of colon cancer in vivo in the inflammatory microenviroment. These results indicate that MSCs stimulated by inflammatory cytokines such as IFN-γ and TNF-α in the tumor microenvironment express higher levels of VEGF via the HIF-1α signaling pathway and that these MSCs then enhance tumor angiogenesis, finally leading to colon cancer growth in mice.